什么是riboEDIT? CRISPR-Cas9體系？
該體系為銳博生物自主開(kāi)發(fā)的CRISPR-Cas9體系（銳博專利號(hào)：108977442A），采用天然復(fù)合物系統(tǒng)（crRNA和tracrRNA）進(jìn)行基因編輯，包括Cas9 mRNA的全RNA體系和基于Cas9蛋白的RNP體系，tracrRNA可實(shí)現(xiàn)大規(guī)模合成，靶向DNA目的序列的crRNA可以高通量合成，針對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞可簡(jiǎn)單通過(guò)化學(xué)轉(zhuǎn)染或電轉(zhuǎn)方式進(jìn)行基因編輯實(shí)驗(yàn)。
riboEDIT? CRISPR-Cas9體系為即用型，不需要自行構(gòu)建gRNA表達(dá)載體，無(wú)需在病毒級(jí)實(shí)驗(yàn)室中操作，無(wú)DNA組分，并且可實(shí)現(xiàn)多個(gè)crRNA指導(dǎo)下的多靶點(diǎn)編輯，大大簡(jiǎn)化前期實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備與操作步驟，更適合于高通量細(xì)胞水平的基因敲除篩選，還提供具有編輯效率保證的CRISPR-Cas9套裝產(chǎn)品，提供方便、省時(shí)、可靠和高效的解決方案。
riboEDIT? CRISPR-Cas9體系優(yōu)勢(shì)
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銳博專利技術(shù)：優(yōu)化的crRNA、tracrRNA和Cas9 mRNA
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即用型體系，更加易用，適合從小規(guī)模到大規(guī)模高通量篩選
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無(wú)需繁瑣克隆構(gòu)建過(guò)程，節(jié)約更多人力和時(shí)間
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無(wú)需病毒級(jí)實(shí)驗(yàn)室，大大降低基因編輯對(duì)實(shí)驗(yàn)環(huán)境的要求
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此外，riboEDIT? CRIPSR-Cas9體系相比于質(zhì)粒載體表達(dá)Cas9和Cas9穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株或慢病毒系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)顯著。
首先，riboEDIT? CRIPSR-Cas9的全RNA體系或Cas9蛋白體系相比質(zhì)粒載體或Cas9穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株而言，Cas9蛋白為瞬時(shí)表達(dá)，脫靶效率低、無(wú)DNA整合風(fēng)險(xiǎn)和啟動(dòng)子兼容性問(wèn)題，大大提高應(yīng)用安全性。然后，它是即用型體系，通過(guò)一步轉(zhuǎn)染，5-6個(gè)工作日即可完成編輯效率檢測(cè)，操作簡(jiǎn)便，顯著縮短實(shí)驗(yàn)周期。其次，不需要自行構(gòu)建載體或包裝慢病毒，不需要病毒級(jí)的實(shí)驗(yàn)室環(huán)境。再次，在大部分細(xì)胞中，比質(zhì)粒表達(dá)載體具體更高的基因編輯效率。
riboEDIT? CRISPR-Cas9具有高效的基因編輯效率
Fig.1 MHCC97H細(xì)胞共轉(zhuǎn)染10pmol riboEDIT? crRNA、10pmol riboEDIT? tracrRNA和1ug riboEDIT? Cas9 mRNA，48小時(shí)后 riboEDIT? T7EI Enzyme酶切檢測(cè)靶位點(diǎn)的剪切效率，候選7個(gè)靶基因的剪切條帶及編輯效率。如圖所示，#1#2表示同一基因不同位點(diǎn)設(shè)計(jì)的2條crRNA。
Fig.2 MHCC97H細(xì)胞共轉(zhuǎn)染6pmol riboEDIT? crRNA、6pmol riboEDIT? tracrRNA和6pmol riboEDIT? Cas9 Protein，48小時(shí)后 riboEDIT? T7EI Enzyme酶切檢測(cè)靶位點(diǎn)的剪切效率，候選7個(gè)靶基因的剪切條帶及編輯效率。如圖所示，#1#2表示同一基因不同位點(diǎn)設(shè)計(jì)的2條crRNA。
Fig.3 riboEDIT? CRISPR-Cas9 mRNA基因編輯體系與riboEDIT? Cas9 RNP復(fù)合物具有等同的靶位點(diǎn)編輯效率。
riboEDIT? CRIPSR-Cas9編輯效率保證套裝和標(biāo)準(zhǔn)套裝
銳博生物提供方便高效的效率保證套裝和標(biāo)準(zhǔn)套裝。效率保證套裝針對(duì)人源基因，利用設(shè)計(jì)軟件挑選評(píng)分高的5條crRNA進(jìn)行合成，基于Cas9 mRNA的體系配置必備試劑，包括tracrRNA、Cas9 mRNA、mRNA轉(zhuǎn)染試劑、陽(yáng)性對(duì)照crRNA套裝、T7E1酶及配套緩沖液等，提供即用型的基因編輯工具。其中效率保證套裝可以確保MHCC97H細(xì)胞的T7E1酶切效率至少1條達(dá)到30%以上并提供相應(yīng)的售后服務(wù)，標(biāo)準(zhǔn)套裝不提供任何編輯效率的保證。
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riboEDIT? CRISPR-Cas9 mRNA Set, 20T
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?? riboEDIT? Designed crRNA（設(shè)計(jì)合成5條crRNA）5*5nmol
?? riboEDIT? tracrRNA, 5nmol
?? riboEDIT? Positive Control crRNA Validation Set for Human, 1 set
?? riboEDIT? mRNA Transfection Reagent 75ul
?? riboEDIT? Cas9 mRNA (0.5ug/ul), 20ug
?? riboEDIT? T7EI Enzyme (10U/ul) , 100U
?? 配套還有緩沖液和無(wú)RNA酶水
riboEDIT? Designed crRNA采用銳博生物優(yōu)化的生物信息學(xué)設(shè)計(jì)，客戶無(wú)需具備crRNA/sgRNA設(shè)計(jì)經(jīng)驗(yàn)，crRNA包含20個(gè)與目標(biāo)DNA序列互補(bǔ)配對(duì)的核苷酸（原間隔序列）和與tracrRNA互補(bǔ)配對(duì)的重復(fù)序列,涵蓋人類和小鼠基因，每個(gè)基因設(shè)計(jì)合成3 – 6段單獨(dú)的sgRNA，其他物種crRNA設(shè)計(jì)需另行評(píng)估。
3. crRNA陽(yáng)性對(duì)照套裝
crRNA陽(yáng)性對(duì)照套裝用于檢測(cè)基因剪切體系的正確性，該套裝包括陽(yáng)性對(duì)照crRNA、正向引物和反向引物。
化學(xué)合成的tracrRNA經(jīng)HPLC純化，能夠抗核酸酶，能與crRNA結(jié)合形成crRNA/tracrRNA復(fù)合物，共同指導(dǎo)Cas9蛋白切割雙鏈DNA。
riboEDIT? Cas9 mRNA為體外轉(zhuǎn)錄生成，具有帽子和polyA尾巴結(jié)構(gòu)，編碼載體為人源密碼子優(yōu)化的S. pyogenes Cas9，帶有核定位信號(hào)（NLS），C端的一個(gè)1XFLAG標(biāo)簽，5’非翻譯區(qū)(5’UTR)及3’非翻譯區(qū)(3’UTR)，以促進(jìn)mRNA的翻譯和提高mRNA的穩(wěn)定性，適用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞基因編輯。
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只需登錄銳博生物官網(wǎng)www.ribobio.com，點(diǎn)擊如下大圖即可進(jìn)入riboEDIT? Cas9 mRNA產(chǎn)品介紹。
在這里，您可以選擇基因編輯效率保證套裝、標(biāo)準(zhǔn)套裝、設(shè)計(jì)crRNA、陽(yáng)性對(duì)照crRNA驗(yàn)證套裝、tracrRNA、Cas9 mRNA、 mRNA轉(zhuǎn)染試劑、Cas9蛋白、T7E1酶等體系產(chǎn)品。
